Trabalhos selecionados para a premiação na Categoria Prêmio Hatton e Fórum científico

Prêmio Hatton

Tissue engineering is the development of biological substitutes for an organ or tissue. Dental pulp tissue engineering would help in the regeneration and long-term outcome of immature teeth whose pulp was irreversible compromised by caries or trauma. The aim of this study was to engineer a vascularized functional dental pulp-like tissue using dental pulp stem cells and endothelial cells. Human dental pulp stem cells from deciduous teeth (SHED) and human dermal microvascular endothelial cells were seeded in poly-L(lactic) acid scaffolds prepared inside the pulp cavity of 1 mm-thick tooth slices. Tooth slice-scaffolds containing cells were implanted in the dorsum of severe combined immunodeficient mice. After 14-28 days, implants were retrieved, fixed, and prepared for histology and transmission electron microscopy. Tooth slices containing pulp tissue or empty tooth slice-scaffolds were used as controls. SHED stably transduced with LacZ (SHED-LacZ) were used to track their contribution to the newly formed tissue. The engineered tissue presented cellularity and morphology that resembled that of regular dental pulp. It was observed the presence of functional blood vessels staining positive for anti-human Factor VIII antibody within the tissue. Cells lining the predentin showed structural characteristics of odontoblasts and stained positive for DSP, a marker for odontoblastic differentiation. SHED-LacZ cells lined the predentin and also differentiated into vascular cells. This study demonstrated the feasibility of human dental pulp tissue engineering using dental pulp stem cells and primary endothelial cells.

H007 - GTPases RhoA and Rac1 are important for amelogenin and DSPP expression during ameloblasts and odontoblasts differentiation
Biz MT*, Marques MR, Crema VO, Modolo F, Moriscot AS, Santos MF
Biologia Celular e do Desenvolvimento - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO. E-mail: micbiz@uol.com.br

During tooth development cell proliferation predominates in morphogenesis and differentiation involves change in form and gene expression. The cytoskeleton is essential for both processes, being regulated by small Ras homology ( Rho ) GTPases proteins. In the present study, the role of the GTPases RhoA and Rac1 during tooth development was evaluated. By immunohistochemistry, both GTPases were strongly expressed during morphogenesis. During cytodifferentiation, RhoA was present in ameloblasts and odontoblasts, while Rac1 and its effector p21-activated kinase (Pak3) were observed only in ameloblasts with a punctual manner. The expression of RhoA mRNA and its effectors Rho kinase (Rock) I and II, Rac1 and Pak3, analyzed by real time polymerase chain reaction (PCR), increased after ameloblasts and odontoblasts differentiation, according to the expression of amelogenin and dentin sialophosphoprotein (DSPP). The inhibition of all Rho GTPases during tooth germ development, analyzed by anterior eye chamber culture, completely abolished amelogenin and DSPP expression, while the specific inhibition of Rocks had only a partial effect. In conclusion, GTPases are important for tooth morphogenesis. Rho proteins are essential for differentiation of ameloblasts and odontoblasts, by regulating the expression of amelogenin and DSPP. RhoA and its effector RockI (highly expressed) contribute for this role. A specific function for Rac1 in ameloblasts, however, remains to be elucidated. Due to its punctual distribution, it is possible that Rac1 has a role in exocytosis/endocytosis. (Support: FAPESP - 01/09047-2)

H016 – Insights of RANK/RANKL/OPG on enamel development. Cardoso VES*, Maria AG, Leite AL, Cestari TM, Garlet GP, Assis GF, Buzalaf MAR
Bioquímica - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - BAURU. E-mail: vecard@uol.com.br

Besides functional differences between ameloblasts and osteoclasts several features support an analogy between their ruffled ends. Osteoprotegerin (OPG) inhibits ruffled ends formation in mature osteoclasts. This study aimed to investigate the involvement of receptor activator of nuclear factor kappaB (RANK)/ RANK ligand (RANKL) and OPG on dental fluorosis (DF) development. Wistar rats were treated for 30 days with 0 (GI), 5 (GII), 50 (GIII) and 100 (GIV) ppm fluoride (F) in the drinking water (n = 9/group). Data from plasma, urine, feces and diet F, and even DF (Thylstrup-Fejerskov Index) supported a doseeffect on F metabolism. Jaws were analyzed for ultrastructural changes and for amelogenin, matrix metalloproteinase 20 (MMP-20), RANKL and OPG through real-time polymerase chain reaction and immunohistochemical assays. G3 and G4 showed DF. G1 was RANK(+) and RANKL(+), and G4 was RANKL(+). G4 showed changes in amelogenin(+) and MMP-20 patterns. Changes in MMP-20 occurred in G2. All groups were OPG(-). OPG and amelogenin transcripts were increased in G2. These data suggest (1) the importance of RANK during enamel formation for the integrity of dental enamel, (2) that most RANK must be soluble (extracellular) during the maturation stage to trigger the end of abnormal ameloblast synthesis in DF and maybe that (3) a 5 ppm F dose in drinking water may trigger initial biochemical/ultrastructural changes in dental enamel in respect to DF with no clinica signs. (Support: FAPs - Fapesp - Proc. 03/13437-6 and 05/01847-0)

H025 – Bond strength and morphological characterization of crown and root dentine treated with adhesive systems Lima ACMR*, Souza-Filho FJ, Goes MF
Clínica Odontológica - UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS. E-mail: endocarolina@yahoo.com.br

This study aimed to characterize the morphology, density and dentine tubule cross-section area of deep crown (DCD) and cervical root dentine (CRD), intact and etched with 32% phosphoric acid (PA) or the acid primer (P). Bond strength and fracture patterns for DCD and CRD were also compared. Human intact premolars (n = 5) were cleaved in sections of DCD and CRD and were treated as follows: G1: DCD + PA; G2: DCD + P; G3: intact DCD; G4: CRD + PA; G5: CRD + P; G6: intact CRD. The sections were prepared for Scanning Electron Microscopy and analyzed by the software Leica IM50 to obtain the density and dentine tubule cross-section area ( µ m2). For microtensile testing, sections of DCD and CRD of 12 teeth were used and divided in: G7: CRD + Single Bond II (SB); G8: CRD + Clearfil Protect Bond (CPB); G9: DCD + SB; G10: DCD + CPB. Beam specimens were obtained and evaluated using a universal testing machine (Instron) at 0,5 mm/min. CRD presented a surface covered with calcosferites, differing it morphologically from DCD. The density (42.627/mm²) and average transversal cross-section area of dentine tubules in CRD did not present significant difference from that of DCD (p > 0,05), according to ANOVA. Average bond strength of DCD (26,6 MPa) was statistically different from CRD (19,7 MPa). The fracture pattern in the hybrid layer and adhesive (mixed) was predominant for both regions. DCD and CRD presented morphological an bond strength differences, but similarities in relation to tubule density and fracture patterns, independent of the adhesive system used. (Support: Fapesp - 05/53290-0)

H043 – Effect of vascular endothelial growth factor receptors inhibition on tumor angiogenesis in head and neck squamous cell carcinoma Miyazawa M*, Dong Z, Zhang Z, Neiva KG, Cordeiro MMR, Oliveira DT, Nör JE Estomatologia - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - BAURU. E-mail: miyazawa@usp.br

The Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) has been considered the most important mediator in inducing tumor angiogenesis and binds to Vascular Endothelial Growth Factor Receptor (VEGFR). PTK787/ZK 222584 (PTK/ZK) is a potent antiangiogenic tyrosine kinase VEGFR inhibitor. To understand the antiangiogenic VEGF/VEGFR pathway of PTK/ZK in squamous cell carcinoma (SCC) of the head and neck region, it was developed in vitro and in vivo studies evaluating Bcl-2, CXCL-8 and CXCL-1 expression. Immunodeficient mice recieved implants of tumor and/or endothelial cells and were treated with PTK/ZK. Tumor progression was evaluated by bioluminescence imaging. Three µ m sections were obtained from paraffin embedded implants for microvessel density analisis and 7 µ m sections for laser microdissection and tumor and endothelial cell RNA retrieving analyzed by RT-PCR and Real time PCR. In vitro studies with co-culture of tumor and endothelial cells were analyzed by RT-PCR, Western Blot and ELISA to evaluate Bcl-2, CXCL-8 and CXCL-1 expression. The in vitro and in vivo results showed important downregulation of Bcl-2 as well as CXCL-8 expression in endothelial cells when treated with PTK/ZK. It was also observed a significant reduction of microvessel density in animals treated with the drug. These results suggest that the antiangiogenic mechanism of PTK/ZK on endothelial cells seems to be by downregulation of Bcl-2 leading to downregulation of CXCL-8, resulting in less tumor growth. In conclusion, PTK/ZK seems to be a promising antiangiogenic drug for SCC adjuvant therapy. (Support : CAPES - 1895/05-2)

H047 - Analysis of the salivary proteins MG1, MG2 and lactoferrin in individuals with aggressive and chronic periodontitis Soares RV*, Rocha DM, Silva KS, Zenóbio EG, Costa FO Mestrado em Clínicas Odontológicas - PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE MINAS GERAIS. E-mail: soaresrv@pucminas.br

The aim of this study was to analyze the pattern of secretion and the expression of MG1, MG2 and lactoferrin in individuals with and without periodontitis. Five individuals with aggressive periodontitis (GAP), 5 with chronic periodontitis (GCP) and 5 without periodontitis (GC) were selected. Periodontal exams were conducted and samples of resting and stimulated submandibular-sublingual saliva collected. Obtained volumes were measured, samples submitted to electrophoresis and analyzed on Western blots probed with specific antibodies. Stimulation significantly raised the volumes in all groups (GAP p = 0.01; GCP p = 0.03; GC p = 0.01). In regard to the pattern of secretion, blots revealed that stimulation leaded to: an increase in MG1 expression in all groups; an increase in MG2 expression in GCP and a decrease in GAP and GC; and to an increase in lactoferrin expression in GAP and GCP, and a decrease in GC. In regard to comparison of expression among groups, blots revealed that under resting conditions, GC exhibited the highest expression of these glycoproteins, whereas GAP showed the lowest levels of MG2 and GCP of MG1 and lactoferrin. Under stimulated conditions, GC exhibited the highest expression of MG1 and MG2, whereas GAP the highest of lactoferrin. In conclusion, the pattern of secretion of these glycoproteins in the three distinct groups is complex and the reduced expression observed in GAP and GCP under resting condition, the predominant circumstance of salivary secretion during a day, indicates that these salivary constituents may play a role in the etiopathogenesis of these diseases. (Support: FIP-PUCMinas - 2006/1352)

Fórum Científico

FC001 - Efeito in vitro da presença de inibidores proteolíticos e de fosfatase na formação de biofilme gerados por Candida albicans de crianças HIV+ Portela MB*, Kneipp LF, Alviano CS, Souza IPR, Soares RMA Microbiologia Geral - UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO. E-mail: mbportela@hotmail.com

A candidíase oral é a lesão oportunista mais encontrada em crianças infectadas pelo HIV, sendo o agente etiológico mais prevalente a Candida albicans . O objetivo do presente estudo foi avaliar a formação de biofilme por Candida albicans na presença de inibidores de fosfatase ácida e inibidores de proteases. Suspensões padronizadas de Candida albicans com 105 leveduras/ml na presença ou ausência de inibidores de fosfatase e proteolíticos foram aplicados na superfície de membranas previamente esterilizadas que permaneceram sobre meio BHI sólido por 72 h a 37°C . Após o crescimento das leveduras, as membranas foram inseridas em tubos com solução salina por 27 minutos e a seguir foram cuidadosamente lavadas com solução salina para remoção das células não aderidas. A remoção dos fungos formadores do biofilme foi realizada através da agitação das membranas em 1 ml de solução salina em vórtex por 20 s. Alíquotas dessas suspensões celulares foram inoculadas em placas com meio BHI sólido e a complexidade da formação do biofilme foi avaliada através da contagem das unidades formadoras de colônias (ufc) após 48 h a 37°C . Foi possível observar que o biofilme correspondente ao sistema controle apresentou-se mais aderente quando comparado aos demais formados na presença dos inibidores. Este dado foi confirmado através da análise em Microscopia Eletrônica de Varredura. Os resultados sugerem que estes inibidores de serina protease e de fosfatase ácida podem ser considerados como importantes coadjuvantes na terapia antifúngica.

FC003 - Influência da dose de energia sobre tensão de polimerização, conversão, propriedades e microinfiltração de restaurações em compósito Calheiros FC*, Sadek FT, Boaro LCC, Daronch M, Rueggeberg F, Braga RR Materiais Dentários - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - SÃO PAULO.E-mail: fecalheiros@gmail.com

Avaliar a influência da dose de energia (H) sobre tensão de polimerização (TP), grau de conversão (GC), propriedades mecânicas e microinfiltração de restaurações em compósito. Um compósito experimental foi fotoativado com 3, 6, 12, 24 ou 48 J/cm². A TP foi monitorada por 10 min com compósito (h = 1 mm ) posicionado entre 2 bastões de vidro (Ø = 5 mm ) presos a uma máquina de ensaios universal. Para análise da microinfiltração máxima (Mmax) e média (Mmed), cavidades em dentes bovinos (Ø = 5 mm , h = 2 mm ) foram restauradas com 2 sistemas adesivos [Adper Single Bond 2 (SB) e Adper Prompt (PR)] e imersas em AgNO3 50%. GC foi avaliado no topo e base (h = 2 mm ) através de FTIR. Resistência a flexão (RF) e módulo de elasticidade (ME) foram obtidos com teste de dobramento em 3 pontos. Dureza Knoop (KHN/topo e KHN/base) foi avaliada nos fragmentos dos espécimes de RF. TP aumentou significantemente com H (3 J/cm²: 1,4 ± 0,3c; 6 J/cm²: 4,3 ± 0,5b; 12 J/cm²: 9,3 ± 0,6a; 24 J/cm²: 9,9 ± 0,7a). Mmed foi influenciada pelo sistema adesivo (SB2 < 6 J/cm² = 12 J/cm² = 24 J/cm²). Mmax foi influenciada apenas por H (3 J/cm² < 6 J/cm² = 12 J/cm² = 24 J/cm²). GC/topo não mostrou diferença significante entre 6 e 12 J/cm² e entre 24 e 48 J/cm². GC/base e ME mostraram diferenças entre todos os níveis de H. RF foi semelhante entre 12 e 24 J/cm² e entre 24 e 48 J/cm². KHN/topo foi diferente entre todos os grupos. KHN/base foi semelhante entre 3 e 6 J/cm². Altas doses de energia devem ser usadas com cautela pelos clínicos que têm a intenção de preservar a integridade da interface adesiva de restaurações em compósito. (Apoio: FAPs - FAPESP - 03/13002-0)

FC004 - Sal de iodônio aumenta a cinética de polimerização em um adesivo odontológico experimental Ogliari FA*, Ely C, Petzhold CL, Demarco FF, Piva E Odontologia Conservadora - UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS. E-mail: ogliari@gmail.com

O presente estudo avaliou a influência de um sal de iodônio na polimerização em tempo real de uma blenda de dimetacrilatos. Uma resina adesiva modelo composta por Bis-GMA, TEGDMA e HEMA foi utilizada. Para promover a fotopolimerização do material, foi utilizado somente canforoquinona(CQ) ou então sistemas binários e ternários de fotoiniciação. O sistema binário foi contituído por 1 mol% de CQ mais diferentes concentrações de difeniliodônio hexafluorofosfato (DPIHFP) ou então de etil 4-dimetilamino benzoato (EDAB). No sistema ternário foram utilizados 1 mol% de CQ, 2 mol% de EDAB e 0,25, 0,5, 1, 2 e 4 mol% de DPIHFP. Para investigar a reação de polimerização em tempo real, um espectrofotômetro no infravermelho acoplado com um sistema ATR foi utilizado. Quando somente CQ foi utilizada como fotoiniciador, uma lenta e limitada conversão foi observada. A adição de um segundo componente (DPIHFP ou EDAB) aumentou a taxa de polimerização e a conversão independente da concentração do iniciador. O sistema ternário de fotoiniciação mostrou um aumento na taxa de polimerização, possibilitando uma elevada conversão em um curto período de tempo. Também no presente estudo, um mecanismo reacional para a polimerização via radical livre de metacrilatos utilizando os sistemas avaliados foi sugerido. O uso de um sal de iodônio como co-iniciador para a polimerização radicular de metacrilatos iniciada pela canforoquinona mostrou-se como uma importante alternativa para o desenvolvimento do sistema de fotoiniciação de um adesivo odontológico.

FC006 - Cinética e equilíbrio de reação entre ascorbato de sódio e peróxido de hidrogênio 35% Freire A*, Takahashi MK, Ignácio SA, Bordin CFW, Carvalho RM, Vieira S. CCBS - Pós-Graduação em Odontologia - PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DO PARANÁ. E-mail: andreavfreire@yahoo.com.br

Estudos recentes têm indicado o uso de antioxidante para eliminar problemas clínicos relacionados ao clareamento dental, geralmente envolvendo o emprego de ascorbato de sódio 10%, porém, esta substância pode diferir quanto à natureza e concentração do agente clareador. Os objetivos do presente estudo foram verificar a cinética de reação entre ascorbato de sódio e peróxido de hidrogênio 35% e determinar a massa de antioxidante necessária para neutralizar a ação deste gel para clareamento. O gel clareador foi submetido à ação do ascorbato de sódio e a titulometria de oxirredução foi utilizada para verificação das concentrações de peróxido de hidrogênio e ascorbato de sódio, bem como para avaliar a cinética de reação, metodologia baseada na Farmacopéia Americana (2005). Os resultados indicaram uma relação direta entre massa de peróxido de hidrogênio e agente antioxidante, e que 5 minutos de contato entre os reagentes foi suficiente para o equilíbrio da reação. Este tempo parece ser clinicamente aceitável com a grande vantagem de eliminar a espera de duas a três semanas após o clareamento para realização de procedimentos adesivos. (Apoio: CAPES - 557315461-34)

FC009 - Análise dos índices PK/PD da doxiciclina no plasma, fluido gengival e avaliação de seu efeito sobre a osteoclastogênesemediada por RANKL .Franco GCN*, Rosalen PL, Groppo FC, Bergamaschi CC, Berto LA, Cortelli SC, Kawai T Biologia Odontológica - UNIVERSIDADE DE TAUBATÉ. E-mail: gilson@fop.unicamp.br

Doxiciclina (Dox) é um antimicrobiano com ação contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Além desta propriedade, Dox é empregada na periodontia na modulação da resposta do hospedeiro (MRH) ao inibir a enzima metaloproteinase de matriz (MMP). Os objetivos deste trabalho foram: 1-integrar os índices PK/PD da Dox para o plasma, fluido gengival (FG) e saliva; 2-analisar os efeitos da Dox sobre a osteoclastogênese com a finalidade de elucidar propriedades adicionais na MRH. Doze voluntários receberam dose oral de Dox (100 mg). A análise PK/PD foi realizada considerando o CIM para P. gingivalis . Para o segundo objetivo, o efeito da Dox sobre os processos de diferenciação e ativação osteoclástica foi verificado por coloração para TRAP e análise da formação de lacunas em dentina. Modelo de indução de osteoclastogênese em calvária foi empregado para a análise do efeito da Dox in vivo . A expressão de proteínas relacionadas à biologia osteoclástica foi verificada por RT-PCR. A análise dos índices PK/PD indicou que 100 mg de Dox foi insuficiente para obter os valores antimicrobianos para ASC/CIM e Cmax/CIM. Os experimentos in vitro e in vivo sobre o efeito da Dox como MRH demonstraram inibição nos processos de diferenciação e ativação dos osteoclastos. Dox modulou a expressão de TRAP, Catepsina K e c-Myc. Portanto, uma dose inicial maior do que 100 mg é necessária para se obter os melhores resultados clínicos antimicrobianos. A análise da Dox na MRH indicou que este fármaco apresentou a propriedade de inibir a diferenciação e ativação osteoclástica, incluindo a regulação gênica. (Apoio: FAPESP - 05/54580-1)

FC010 - Epidemiologia analítica da perda clínica de inserção em uma população isolada brasileira Corraini P*, Pannuti CM, Romito GA, Baelum V, Pustiglioni AN, Pustiglioni FE Estomatologia - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - SÃO PAULO. E-mail: priscilacorraini@gmail.com

Este estudo propôs-se a avaliar a prevalência, extensão e severidade de perda clínica de inserção periodontal (PCI), além da associação com possíveis indicadores de risco demográficos, ambientais e comportamentais com PCI em uma população isolada brasileira. Esta população é caracterizada pela ausência de serviços de saúde, higiene bucal precária e alta ocorrência de consangüinidade. Para este estudo transversal, todos os indivíduos com 12 ou mais anos de idade (n = 256) residentes na microárea Cajaíba, região sudeste do Brasil, foram identificados por meio de um censo. Um total de 214 respondentes foram entrevistados por meio de um questionário estruturado, e receberam um exame clínico que consistiu na avaliação de 6 sítios por dente em toda a boca. Perda clínica de inserção = 5 mm foi observada em 8%, 37%, 70%, 83%, e 100% dos indivíduos dos grupos etários de 12-19, 20-29, 30-39, 40-49 e 50 ou mais anos de idade, respectivamente; enquanto que a prevalência de PCI = 7 mm foi de 5%, 8% 20%, 67% e 83%, dependendo do grupo etário, respectivamente. Análises de regressão logística identificaram grandes quantidades de placa visível (OR= 2,8) e cálculo supragengival (OR= 2,9-10,6), idade (OR= 11,4) e fumo (OR= 2,4) como indicadores de risco para PCI = 5 mm ; e fumo (OR= 8,2) para PCI = 7 mm. Esta população apresenta prevalência e severidade de PCI altas. A prevalência precoce e o fato de indicadores de risco tradicionais também serem identificados nesta população podem indicar que a susceptibilidade para o efeito de exposições ambientais e comportamentais possa ser considerada um fator-chave para a alta ocorrência de PCI nesta população. (Apoio: FAPs - Fapesp - 04/15287-4)