O perfil epigenético e transcricional individual está relacionado à aquisição de fenótipo osteogênico distinto em células mesenquimais
Ferreira RS, Assis RIF, Racca F, Françoso BG, Feltran GS, Zambuzzi WF, Silva RA, Andia DC
Programa de Pós Graduação - Doutorado - UNIVERSIDADE PAULISTA - SÃO PAULO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
As células mesenquimais do ligamento periodontal (PDLCs) apresentam alto (h-) e baixo (l-) potencial osteogênico, influenciando nos resultados clínicos de regeneração tecidual. Neste estudo, investigamos o impacto do perfil epigenético e transcricional individual de h- e l-PDLCs no potencial osteogênico. A (hidroxi)metilação global do genoma e de genes específicos, expressão gênica e imunofluorescência foram realizadas em ambas as PDLCs nos grupos DMEM (não induzido à osteogênese - basal) e OM (induzido - 3º e 10º dias de diferenciação osteogênica) in vitro. Os resultados mostraram perfil epigenético global distinto entre as PDLCs, com maiores diferenças no 10º dia de OM, e maiores concentrações de sondas diferencialmente metiladas em corpo de gene, íntron e open sea (3º dia), aumentando em TSS200 e regiões insulares, aos 10 dias, em DMEM. Em consonância, os perfis transcricionais entre h- e l-PDLCs também foram distintos no basal. l-PDLCs demonstraram níveis mais elevados de transcritos para NANOG/OCT4/SOX2, BAPX1, DNMT3A, TET1/3, e mais baixos de RUNX2, confirmados por imunofluorescência. Após a indução osteogênica, o perfil transcricional distinto dos genes de multipotencialidade foi mantido entre as PDLCs. Em l-PDLCs, a anti-correlação entre metilação do DNA e expressão de RUNX2 e NANOG indica que este mecanismo epigenético pode modular ambos os genes. Perfis epigenético e transcricional individuais têm impacto significativo na aquisição do fenótipo osteogênico em células mesenquimais. (Apoio: FAPs - Fapesp N° 2017/07944-5 | FAPs - Fapesp N° 2017/12158-9 | FAPs - Fapesp N° 2019/01727-8)AO0026 - Apresentação Oral
Área:
1 - Biologia craniofacial
Efeito de células-tronco mesenquimais do ligamento periodontal com alto e baixo potencial osteogênico na regeneração do tecido ósseo
Adolpho LF, Lopes HB, Weffort D, Assis RIF, Ruiz KGS, Andia DC, Rosa AL, Beloti MM
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - RIBEIRÃO PRETO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
O ligamento periodontal é fonte de células-tronco mesenquimais (MSCs) com diferentes potenciais osteogênicos, que podem ser empregadas na terapia celular para regenerar o tecido ósseo. O objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade de MSCs derivadas do ligamento periodontal com alto e baixo potencial osteogênico (AP e BP), bem como da mistura de ambas, para regenerar tecido ósseo. Células AP e BP foram cultivadas em meio osteogênico por até 21 dias e caracterizadas in vitro (n=5) por meio da atividade de fosfatase alcalina (ALP) e formação de matriz mineralizada. Defeitos de 5 mm foram criados na calvária de ratos (n=12) e tratados com injeção local de 5x106 células AP, BP e AP+BP (1:1) ou PBS (veículo). Após 4 semanas, o osso formado foi avaliado por micro CT, análise histológica e PCR em tempo real. As células AP apresentaram maior atividade de ALP (p=0,001), sem diferença na formação de matriz mineralizada (p=0,157). O volume ósseo foi semelhante entre os grupos tratados com células (p=0,872; 0,639; 0,978) e maior que PBS (p=0,001). Todos os grupos apresentaram aspectos histológicos semelhantes, com osso neoformado em diferentes estágios de maturação. A expressão gênica de Runx2, Alp, Ocn, Vegfa e Rankl foi maior no tecido formado nos defeitos tratados com células AP comparados com os demais grupos (p=0,001). Em conjunto, os dados demonstraram que, independentemente dos diferentes potenciais osteogênicos, MSCs derivadas do ligamento periodontal induzem formação óssea semelhante e têm potencial para serem empregadas na terapia celular para regenerar tecido ósseo. (Apoio: FAPs - Fapesp N° 2019/10076-0)AO0029 - Apresentação Oral
Área:
1 - Cirurgia bucomaxilofacial
Desempenho de discos poliméricos funcionalizados por células tronco de polpa dentária humana na angiogênese
Oliveira NK, Prado FCR, Ferraz EP, Corrêa L, Deboni MCZ
Cirurgia e Traumatologia Bucomaxiofacial - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - SÃO PAULO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
A engenharia de biomateriais tem um papel importante no desenvolvimento de estruturas que forneçam um ambiente favorável de proliferação e diferenciação celular para neoformação óssea. O sucesso na substituição de tecidos depende da adequada angiogênese. O objetivo foi verificar o desempenho de discos de poli ε-caprolactona/polirotaxano carregado por células tronco de polpa dentária humana (hDPSC) na angiogênese em um ensaio em membrana corioalantóica (MCA). As hDPSCs foram cultivadas por 14 dias e depois de semeadas (1x104) sobre discos poliméricos foram implantadas sobre MCA no 7º dia embrionário de ovos de galinha fertilizados em 4 grupos experimentais: hDPSCs em meio clonogênico; ou em meio mineralizante; um controle positivo com apenas HDPSCs e um grupo controle negativo sem intervenção. No 14º dia embrionário imagens digitais foram avaliadas em macroscopia para quantidade de vasos e intersecções vasculares e após a MCA foi removida para microscopia da quantidade, diâmetro e área de formações vasculares. Os dados foram submetidos a teste de Kruskal Wallis com significância de 5%. Houve um aumento significativo do número de vasos e intersecções na presença do conjunto disco polimérico e células. Houve maior (p=0.018) área de aberturas vasculares quando a blenda estava presente mesmo sem hDPSCs. A blenda polimérica estimula a angiogênese quando funcionalizada por células tronco.AO0031 - Apresentação Oral
Área:
1 - Biologia craniofacial
Regeneração de defeitos ósseos: efeito de injeções locais combinadas de células-tronco mesenquimais da medula óssea e do tecido adiposo
Barbosa ACL, Freitas GP, Tótoli GGC, Adolpho LF, Weffort D, Beloti MM, Rosa AL
Cirurgia Buco Maxilofacial e Periodontia - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - RIBEIRÃO PRETO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
A terapia celular, principalmente utilizando células-tronco mesenquimais da medula óssea (CTMs-MO) e do tecido adiposo (CTMs-TA), é uma das estratégias para tratamento de defeitos ósseos. Considerando que as CTMs-MO apresentam maior comprometimento com a diferenciação osteogênica e as CTMs-TA, com a angiogênica e que ambos os processos são relevantes na regeneração óssea, nossa hipótese é que a terapia celular combinando CTMs-MO e CTMs-TA induz maior formação óssea. CTMs foram obtidas de medula óssea e de tecido adiposo, cultivadas e caracterizadas por imunofenotipagem por citometria de fluxo. Foram criados defeitos de 5mm de diâmetro em calvária de ratos e após 2 semanas injetadas localmente as combinações de CTMs-MO:CTMs-TA (1:1, 1:3 e 3:1), CTMs-MO, CTMs-TA ou PBS sem células. Após 8 semanas, o tecido ósseo formado foi avaliado por microtomografia e histologia. Os dados foram comparados por ANOVA e teste de Tukey (p≤ 0,05). Ambas as culturas apresentaram perfil imunofenotípico característico de CTMs. A combinação 3:1 foi a mais efetiva em aumentar a formação óssea como comprovado pelos parâmetros microtomográficos volume ósseo, volume ósseo/volume total, superfície óssea, número de trabéculas, densidade mineral óssea e separação trabecular. A análise histológica confirmou que os defeitos ósseos estavam quase completamente reparados quando tratados com a combinação 3:1. O efeito sinérgico entre CTMs-MO e CTMs-TA, cujos mecanismos necessitam ser desvendados, representa avanço na utilização de CTMs para a regeneração do tecido ósseo. (Apoio: CAPES | FAPs - Fapesp)AO0032 - Apresentação Oral
Área:
1 - Cirurgia bucomaxilofacial
Padrão dos traumatismos maxilo-faciais e fatores associados: um estudo exploratório de 8 anos
Porto DE, Cavalcanti AL, Andrade ESS
Programa de Pós Graduação Em Odontologia - UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
Esta pesquisa se propôs a analisar o padrão dos traumatismos maxilo-faciais (TMFs) em hospitais de referência no Nordeste do Brasil. O estudo foi transversal com 30.325 prontuários de pacientes com TMF atendidos entre 2011 e 2019. Realizou-se análise de regressão múltipla para estimar a razão de prevalência (RP), com intervalo de confiança de 95% (95%IC) e nível de significância p≤ 5%. Pacientes de 41 a 60 anos (RP=1,99; 95%IC=1,26-3,18; p<0,001), vítimas de acidentes de trânsito (RP=2,41; 95%IC=2,07-2,81; p<0,001), com fratura de mandíbula (RP=52,6; 95%IC=30,5-90,8; p<0,001), tiveram maior tempo de internação. Pacientes de 0 a 20 anos (RP=0,91; 95%IC=0,85-0,97; p=0,003), vítimas de agressão física (RP=0,77; 95%IC=0,75-0,79; p<0,001), com fratura de terço médio (RP=142,4; 95%IC=74,2-273,3; p<0,001), submetidos à redução cruenta (RP=31,6; 95%IC=16,5-60,7; p<0,001), tiveram maiores custos. Pacientes do sexo masculino (RP=4,42; 95%IC=3,37-5,78; p<0,001), vítimas de acidentes de trânsito (RP=0,37; 95%IC=0,23-0,61; p<0,001), sofreram TMFs de maior severidade (FISS ≥ 3). O consumo de bebida alcoólica, o não uso de equipamento de proteção individual e o período de ocorrência (feriados ou finais de semana), contribuíram estatisticamente para o aumento do tempo de internação, custos e severidade dos TMFs. Estratégias precisam ser adotadas para entender os fatores associados aos TMFs como a realocação de recursos para melhorar os serviços e a vigilância em rodovias, bem como a implementação de políticas e programas de prevenção direcionados a este público. (Apoio: CAPES)AO0035 - Apresentação Oral
Área:
2 - Terapia endodôntica
Mapeamento de marcadores de formação óssea liberados por cimentos à base de silicato
Oliveira MCG, Queiroz IOA, Mello WG, Machado T, Vasconcelos BC, Oliveira SHP, Duarte MAH
Dentistica, Endodontia e Materiais Dentá - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - BAURU
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
O objetivo deste estudo foi mapear/rastrear os marcadores de formação óssea liberados pelos cimentos MTA Fillapex, BioRoot e cimento obturador experimental (CEO). Para isso, tubos de polietileno preenchidos com os cimentos ou vazios foram implantados no tecido subcutâneo de ratos Wistar. Aos 7, 15, 30 e 45 dias após a implantação, os animais foram anestesiados e amostras de sangue foram colhidas para mensuração de Cálcio (Ca2+), Fósforo (F) e Fosfatase Alcalina (FA). Em seguida, o tecido subcutâneo, cérebro, fígado e rins foram removidos e processados para análise de Ca2+ e F em ICP-OES. Kruskal-Wallis seguido pelo teste de Dunn e ANOVA seguido pelo teste de Tukey foram utilizados. Níveis semelhantes de Ca2+ foram observados no tecido subcutâneo em todos os grupos, embora, aos 45 dias, uma redução nos níveis séricos de Ca2+ na presença de CEO em comparação com o BioRoot e MTA Fillapex e um aumento no fígado em comparação com MTA Fillapex foram identificados. Nenhum traço de F foi detectado em qualquer tecido; além disso, os níveis séricos de F e FA do MTA Fillapex foram maiores no dia 30. Podemos concluir que Ca2+ foi identificado em todos os tecidos na presença de todos os cimentos. A regulação dos níveis de marcadores ósseos promovidos pelos cimentos pode modificar a homeostase corporal e induzir danos teciduais. MTA Fillapex mostrou-se capaz de provocar efeitos sistêmicos, já que apresentou maiores níveis em comparação com os outros cimentos, demostrando que a composição do cimento pode afetar/interferir não só no processo de reparo local, mas também na saúde sistêmica. (Apoio: CNPq N° 30358/2016-4)AO0036 - Apresentação Oral
Área:
2 - Terapia endodôntica
Monitoramento microbiológico da reintervenção endodôntica em dentes portadores de periodontite apical crônica e por motivos protéticos
Godoi Jr. EP, Francisco PA, Bícego-Pereira EC, Lima AR, Soares AJ, Ferraz CCR, Marciano MA, Gomes BPFA
Odontologia Restauradora - FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE PIRACICABA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
A reintervenção endodôntica (RE) é a primeira opção de tratamento da infecção secundária/persistente, sendo também indicada por motivos protéticos (MP). Os objetivos foram: a) investigar a microbiota dos canais radiculares (CRs) de dentes submetidos a RE pela presença de periodontite apical crônica (PAC) e por MP; b) monitorar a eficácia das etapas da RE através da redução da carga microbiana; c) investigar associações entre bactérias e aspectos clínicos. A amostra consistiu de 15 dentes indicados à RE pela presença de PAC (G1) e 15 por MP (G2). Amostras foram coletadas dos CRs após a abertura coronária, após o preparo químico-mecânico e após 30 dias de uso da medicação intracanal. O conteúdo foi analisado pelo Nested-PCR para detecção de 17 espécies bacterianas. A carga microbiana durante as etapas da RE foi verificada pela contagem de unidades formadoras de colônia (UFC). A análise estatística dos dados foi realizada através dos testes Exato de Fischer, Shapiro-Wilk, Mann-Whitney, Wilcoxon e McNemar. As espécies mais encontradas nas coletas iniciais em ambos os grupos de estudo foram E. faecalis, F. nucleatum e P. gingivalis. RE foi eficaz em reduzir a carga microbiana nos grupos G1 e G2. Associações significantes entre bactérias específicas e sinais e sintomas clínicos foram encontradas. Concluiu-se que a comunidade presente nos CR de dentes indicados ao RE é mista e heterogênea. A carga microbiana dos CR com PAC é maior do que dos CR sem PAC. O RE é eficiente na redução da carga microbiana dos CR. Existem associações entre bactérias específicas e sinais e sintomas clínicos. (Apoio: CAPES N° 001 | FAPESP N° 2015/23479-5 | CNPq N° 303852/2019-4)AO0037 - Apresentação Oral
Área:
2 - Biologia pulpar
Perfil inflamatório da periodontite apical associada à inalação de fumaça de cigarro em ratos: análise histológica e imunohistoquímica
Vasques AMV, Silva ACR, Cury MTS, Bueno CRE, Ervolino E, Cintra LTA, Dezan-Junior E
Odontologia Restauradora - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA - ARAÇATUBA
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
O tabagismo é um fator de risco para a saúde oral e sistêmica, agravando o desenvolvimento de doenças periodontais. A periodontite apical é caracterizada por processo inflamatório crônico com destruição dos tecidos periapicais e a literatura sugere seu desenvolvimento alterado pela ação do tabagismo. Para avaliar, foram utilizados 32 ratos machos divididos em 4 grupos (n= 8): Controle (C); Fumantes (S); Periodontite apical (AP); e Fumante com Periodontite Apical (SAP). Os animais dos grupos S e SAP inalaram a fumaça do cigarro por 50 dias, com início no dia -20, onde os animais permaneceram em uma câmara de tabagismo por 8 min 3x/dia. No dia 0 os grupos SAP e AP tiverem as polpas do 1o molar inferior exposta ao meio bucal por 30 dias. Nesses 30 dias subsequentes os animais dos grupos S e SAP continuaram inalando fumaça, totalizando os 50 dias de inalação. Após o período experimental, foram eutanasiados e as mandíbulas processadas para análise inflamatória, imunohistoquímica, e análise laboratorial sanguínea. Dados paramétricos foram analisados por ANOVA e não paramétricos por Mann-Whitney (P<.05). O grupo SAP apresentou intenso infiltrado inflamatório (score 4) em relação ao grupo AP (escore 3) e C e S (escore 1) (P <.05). As interleucinas IL-6, IL-1β e TNF-α se mostraram aumentadas nos grupos AP e SAP (P<.05). As séries vermelhas e brancas também se mostram alteradas no grupo SAP, com maior número de neutrófilos (P<.05). O impacto negativo do tabagismo sobre os tecidos periapicais promove alterações inflamatórias e imunes agravando o desenvolvimento da periodontite apical. (Apoio: CAPES N° 88882.435558/2019-01)AO0038 - Apresentação Oral
Área:
2 - Terapia endodôntica
Avaliação do preparo biomecânico de canais radiculares amplos com uso de instrumentos rotatórios de NiTi termicamente tratados e taper .01
Camargo RV, Carvalho KKT, Petean IBF, Silva-Sousa AC, Silva-Sousa YTC, Mazzi-Chaves JF, Sousa-Neto MD
Odontologia Restauradora - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - RIBEIRÃO PRETO
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
Avaliou-se a eficácia do preparo biomecânico de canais radiculares amplos com instrumentos de NiTi termo tratados e conicidade reduzida (./01), por microtomografia computadorizada (micro-CT) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Vinte incisivos centrais superiores com canais circulares e amplos (Ø: 0,50 a 0,70 mm à 1mm do forame apical), foram divididos aleatoriamente em 2 grupos experimentais (n = 10) de acordo com o preparo biomecânico: instrumentação manual (IM) e XP-Endo Shaper (XPS). Os dentes foram escaneados pré e pós-preparo para avaliação de alterações nos parâmetros bidimensionais e tridimensionais. A análise qualitativa em MEV foi realizada para avaliação da formação do batente apical. A análise de variância evidenciou que para área (1,31±0,91), perímetro (0,42±0,28), diâmetros maior (0,38±0,26) e menor (0,50±0,33), volume (6,59±2,07) e área de superfície (14,46±5,73), a IM apresentou as maiores médias de aumento comparado à XPS (p <0,05), sem diferença para o parâmetro de circularidade (p> 0,05), independente do terço radicular avaliado. Já os valores de SMI e porcentagem de paredes tocadas, não revelaram diferença significativa (p> 0,05) entre os grupos. As imagens em micro-CT e MEV evidenciaram que o XPS permitiu o desgaste dentinário seletivo, bem como a formação de batente apical conservador. O uso de instrumentos rotatórios de NiTi termicamente tratados, com diâmetro e conicidade reduzidos (./01), promoveu desgaste conservador da estrutura dentinária e permitiu a formação do batente apical em canais radiculares amplos. (Apoio: CAPES N° 33002029032p4 | FAPs - FAPESP N° 2018/14450-1)AO0041 - Apresentação Oral
Área:
2 - Terapia endodôntica
Apresentação de uma nova proposta de irrigante endodôntico
Tavares SJO, Scelza Neto P, Póvoa HCC, Souza ACN, Batista AC, Alves GG, Iorio NLP, Scelza MFZ
Odontoclínica - UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE
Conflito de interesse: Não há conflito de interesse
Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia antibacteriana e a citotocompatibilidade de uma nova solução irrigante produzida a partir do ácido cítrico (AC) 10% combinado com clorexidina (CHX) 1%, denominada de Killer Irrigant. Trinta e cinco dentes humanos de canal único extraídos foram instrumentados com R25, e infectados com Enterococcus faecalis por 4 semanas, seguido de irrigação com as seguintes substâncias: 1% CHX, 10% CA, 2,5% de hipoclorito de sódio (NaOCl), Killer Irrigant e água estéril (controle). Amostras microbiológicas foram coletadas com pontas de papel imediatamente e 18 h após a irrigação. A presença bacteriana foi verificada quantitativamente pela contagem de unidades formadoras de colônias (log10 UFC/mL). A citotoxicidade foi avaliada de acordo com a norma ISO 7405:2008, utilizando osteoblastos humanos (MG-63). Nenhuma diferença significativa na composição bacteriana foi observada entre 1% CHX, 10% CA, Killer Irrigant e 2,5% NaOCl (p>0,05) imediatamente após a irrigação. Após 18 horas, apenas o Killer Irrigant reduziu totalmente a presença de E. faecalis no sistema de canais radiculares. O teste do MTT indicou que a solução Killer Irrigant não apresenta citotoxicidade, com viabilidade equivalente ao grupo controle, não exposto (p>0,05). Esses resultados sugerem o potencial uso desta nova solução para controle microbiológico durante o tratamento endodôntico.